人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建 1
人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建
目的 克隆人骨保護素(OPG)編碼區基因并構建其真核表達載體.方法 以人骨肉瘤細胞系MG63總RNA為模板,采用RT-PCR方法獲取OPG編碼區基因核苷酸序列,應用定向克隆技術,構建真核表達載體pcDNA3.1-OPG-IRES-EGFP.結果 獲取的OPG編碼區全長核苷酸序列與文獻報道的完全一致,經PCR和多酶切鑒定證實構建的表達載體正確.結論 獲得了人骨保護素(OPG)編碼區基因,并成功構建了其真核表達載體.
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人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建通用一篇（擴展1）
——人防御素-5基因的克隆和真核表達載體的構建實用1份
人防御素-5基因的克隆和真核表達載體的構建 1
人防御素-5基因的克隆和真核表達載體的構建
目的 對人防御素5(HD-5)基因進行克隆,構建真核表達載體HD5-pPICZαA.方法 從人cDNA文庫中PCR擴增HD-5基因片段,用EcoR I和Xba I分別雙酶切HD-5基因擴增產物和畢赤酵母表達載體pPICZαA,用T4DNA連接酶連接目的 基因片段和pPICZαA,然后轉化到E.coil Top10中,Zeocin篩選轉化子并進行PCR、酶切和序列鑒定.結果 提取陽性克隆的重組質粒,EeoR I和xba I雙酶切后跑電泳獲得預期條帶;同時重組質粒經序列測定,證實HD-5基因正確插入pPICZαA中,插入位置、方向均正確.結論 成功構建人防御素5基因的真核表達載體HD5-pPICZαA,為HD-5蛋白的真核真核表達奠定基礎.
李華(遼寧醫學院附屬第一醫院腫瘤科,遼寧錦州,121000)
吳學敏,單穎(遼寧醫學院免疫與病原生物學教研室,遼寧錦州,121000)?
人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建通用一篇（擴展2）
——小鼠睫狀神經營養因子基因的克隆及真核表達載體的構建(一)份
小鼠睫狀神經營養因子基因的克隆及真核表達載體的構建 1
小鼠睫狀神經營養因子基因的克隆及真核表達載體的構建
目的:分別構建野生型和截短型小鼠睫狀神經營養因子(CNTF)基因的真核表達載體.方法:通過逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)擴增小鼠CNTF野生型全長編碼序列,體外定點突變獲取截短型CNTF的互補DNA(cDNA)編碼序列,將上述兩序列分別克隆至pGEM-TEasy載體,經限制性內切酶EcoRⅠ和XbaⅠ雙酶切后,將野生型和截短型CNTF基因連入pTracer-CMV真核表達載體,DNA測序鑒定.結果:PCR成功擴增了野生型和截短型CNTF基因,DNA序列分析證實兩種真核表達載體中的CNTF序列與Gene Bank中目的序列一致.結論:野生型和截短型CNTF基因真核表達載體的成功構建為視網膜色素變性(RP)的基因治療研究奠定了基礎.
左愛軍,梁東春,ZUO Aijun,LIANG Dongchun(天津市內分泌研究所)
李寧東,LI Ningdong(天津市眼科醫院)
趙堪興,ZHAO Kanxing(300070,天津醫科大學)?
人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建通用一篇（擴展3）
——皮蠅素A基因的克隆及其畢赤酵母表達載體的構建實用一份
皮蠅素A基因的克隆及其畢赤酵母表達載體的構建 1
皮蠅素A基因的克隆及其畢赤酵母表達載體的構建
提取采自甘肅瑪曲皮蠅一期幼蟲的總RNA,合成cDNA,根據設計的特異引物,利用PCR技術擴增出皮蠅素A(Hypodermin A,HA)基因片段,用Xho Ⅰ、Xba Ⅰ消化,將消化后的目的基因HA純化并回收,與經同樣的酶消化后并純化回收的裁體pPICZa連接并轉化,獲得重組表達質粒pPICZa-HA,經PCR、酶切、測序表明,目的基因插入位置、方向和閱讀框正確.
蔣錫仕,JIANG Xi-shi(西南民族大學,四川成都,610041)?
人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建通用一篇（擴展4）
——擬南芥抑芽基因SPS的克隆及植物表達載體的構建范文1份
擬南芥抑芽基因SPS的克隆及植物表達載體的構建 1
張福城(**熱帶農業科學院橡膠栽培研究所,農業部熱帶作物栽培生理學重點開放實驗室,海南,儋州,571737)?
人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建通用一篇（擴展5）
——毛白楊纖維素合成酶基因(PtoCesA1)克隆、序列分析及其植物表達載體優選【一】篇
毛白楊纖維素合成酶基因(PtoCesA1)克隆、序列分析及其植物表達載體 1
齊力旺,王建華,張守攻,QI Li-wang,WANG Jian-hua,ZHANG Shou-gong(**林業科學研究院林業研究所細胞生物學實驗室,**,100091)?
人骨保護素編碼區基因的克隆及其真核表達載體的構建通用一篇（擴展6）
——雞CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表達質粒的構建范本1份
雞CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表達質粒的構建 1
雞CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表達質粒的構建
用Trizol提取4～6周齡白萊航雞、伊莎雞、固始雞和隱性白羽雞胸腺**的總RNA,再用Oligo-dT纖維素富集mRNA后,用RT-PCR擴增出雞CD3γδ基因cDNA.PCR產物切膠回收后連入T載體,序列分析發現伊莎雞、固始雞和隱性白羽雞的CD3γδ cDNA比白萊航雞多一個氨基酸,且在胞外區的一個區域有4個氨基酸的差異.將白萊航雞的CD3γδ從T載體上切下連入pcDNA3.1(+),再將重組質粒pcDNA3.1-CD3轉染COS-7細胞,用已知的抗雞CD3的單克隆抗體測得轉染細胞中CD3γδ分子的表達,這說明構建的真核表達質粒正確,為下一步用DNA免疫的**研制抗雞CD3的單克隆抗體以及研究雞CD3分子的結構和功能打下了基礎.